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石蜡切片非特异性染色产生原因及其解决方案

2022-07-27 10:20:27

组织芯片


1、游离荧光素残留在二抗中。一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。二抗配置时用透析法或层析法分离荧光素标记的二抗和游离的二抗。购买高质量、高纯度的荧光素二抗。组织芯片


2、抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。


3、组织抗原封闭不全。除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如 Forssman 氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。延长血清封闭时间。


4、从组织中难于提纯抗原性物质,所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体,以致容易混淆。


5、抗体分子上标记的荧光素分子太多,这种过量标记的抗体分子带过多的阴离子,可吸附于正常组织上而呈现非特异性染色。


6、荧光素不纯、标本固定不当等。


7、一抗和二抗孵育条件和浓度不合适。调整一抗和二抗孵育条件和浓度至zui佳。


8、一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次数和延长清洗时间。


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